Microbiología

El agar, una sustancia similar a la gelatina que se extrae de las algas rojas, es usado comúnmente para cultivar microorganismos.   Se le agregan varios nutrientes para favorecer el crecimiento bacteriano y se coloca tanto en placas planas como en tubos de ensayo. Cuando se coloca en un tubo de ensayo, el agar está en forma líquida. Estos luego son colocados en ángulo para que se enfríen y solidifiquen, creando una superficie inclinada, o un agar inclinado (agar slant, en inglés).

La superficie inclinada del agar les da a las bacterias una mayor superficie donde pueden crecer dentro del tubo de ensayo.

 Los medios de agar inclinado pueden usarse para cultivar e identificar células bacterianas. Es difícil intentar identificar bacterias desde una muestra muy grande, que estas son pequeñas y pueden ser difíciles de encontrar. Sin embargo, cuando se colocan sobre el agar inclinado, las células bacterianas se dividirán rápidamente y en varias horas habrán producido suficientes células que pueden ser examinadas en el microscopio.

 

 

PRECAUCIONES.

En esta siembra se debe tener mayor cuidado, puesto que un contaminante del aire puede superar en crecimiento al microorganismo de estudio, por lo tanto se deber tomar las siguientes precauciones:

 

-Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir, de modo que los microorganismos del aire caigan en las paredes externas del tubo y no en la bica de este.

 

-Los tapones se deben mantener en la mano contraria a aquella que contiene el tubo, sosteniéndolos entre el dedo menique, el anular y el dedo del corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro lugar.

 

- Flamear la boca de tubo antes de cerrarlo después de la siembra o inoculación.

 

- Esterilizar el asa adecuadamente (toda porción que entra en contacto con el medio de cultivo).

 

- Sumergir el asa en el medio de cultivo, sin tocar las paredes del tubo.

 

- Enfriar el asa en una parte del medio, sin deteriorar el mismo.

 

- Después de realizar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca del tubo.

 

- En las siembras por picadura y mixtas, evite romper el medio de cultivo, así también utilice asas totalmente rectas.

 

 

 

 

 

 

 

SIEMBRAS.

 

 

Siembra en tubos por estrías simples.

 

Se realiza en un tubo con medio solido inclinado (en bisel o pico de flauta), y deslizando el asa sobre la superficie expuesta del agar de manera que se marque con movimiento en zigzag o surcos en la superficie. El proceso se inicia en el fondo y se va avanzando hacia arriba por el área inclinada.

Siembra en tubos por picadura.

 

Se realiza con asa recta en punta en tubos de medios sólidos y semisólidos. Se realiza introduciendo el asa cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el centro de superficie, llegando con el extremo del asa al fondo del tubo y retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. Una siembra con asa (de argolla) o con cierto movimiento de vaivén podría originar un patrón de crecimiento que se interpretaría erróneamente como movilidad bacteriana.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Siembra en tubos por picadura.

 

Se realiza con asa recta en punta en tubos de medios sólidos y semisólidos. Se realiza introduciendo el asa cargada con el microorganismo al medio de cultivo por el centro de superficie, llegando con el extremo del asa al fondo del tubo y retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la picadura. Una siembra con asa (de argolla) o con cierto movimiento de vaivén podría originar un patrón de crecimiento que se interpretaría erróneamente como movilidad bacteriana.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

CARACTERIZACION DEL CRECIMIENTO SOBRE AGAR NUTRITIVO INCLINADO.

Los cultivos en este medio se inoculan en una sola línea recta, y se evalúan de la siguiente manera:

ABUNDANCIA DE CRECIMIENTO. La cantidad de crecimiento es designada como ninguna, leve, moderada, o abundante.

PIGMENTACION. Los microorganismos cromogénicos pueden producir pigmentos intracelulares que son responsables de la coloración de las colonias; la mayoría de los microorganismos son no-cromogénicos y aparecen en tonalidades que van desde el blanco al gris.

CARACTERISTICAS OPTICAS. Pueden evaluarse con base en la cantidad de luz transmitida a través del crecimiento, estas características son descritas como: opaca, translucida o transparente.

FORMA. La apariencia del crecimiento de la siembra en una sola línea sobre la superficie del agar inclinado se designa a la siguiente forma:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

a). FILIFORME. Crecimiento en forma de hilo con bordes lisos continuos.

b). EQUINULADO. Crecimiento en forma de hilo con bordes irregulares continuos.

c). BARBADO. Colonias semi-con fluentes o no confluentes.

d). DIFUSO. Crecimiento difuso y reducido.

e). ARBORESCENTE. Crecimiento en forma de árbol.

F). RIZOIDE. Crecimiento en forma de raíz.

 

 

 

CRECIMIENTO BACTERIANO EN TUBO.

Existen diferentes tipos de bacterias que crecen en tubo, la cuales son:

 

Bacterias aerobias estrictas. Forman parte de un tipo de organismo que necesita de un ambiente que contenga oxígeno diatómico (un gas compuesto por dos átomos de oxígeno) para poder existir y desarrollarse adecuadamente. Utilizan el oxígeno para oxidar sustratos (tales como grasas y azúcares) para obtener energía. (1)

 Bacterias anaerobias estrictas. Son aquellas que para crecer en la superficie de un medio de cultivo necesitan una atmósfera sin oxígeno, ya que este elemento es tóxico para ellas. Carecen del sistema del citocromo oxidasa, superóxido dismutasa y catalasa para metabolizar el O2. (2)

 

Facultativas. Son bacterias que se adaptan para crecer y metabolizar tanto en presencia como en ausencia de oxígeno. (3)

 

Microaerófilo.  Requieren oxígeno en niveles inferiores a los presentes en la atmosfera. Emplean oxígeno pero en cantidades muy bajas. (4)

 

Aerotolerante. Pueden sobrevivir en presencia de oxígeno pero no lo emplean ya que son anaeróbicos. Toleran concentraciones bajas de oxigeno: 2 a 8 %.(5)