Microbiología

¿Pero que es la tinción Gram?

 

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias Gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

 

Pasos

 

• Recoger las muestras necesarias.

• Hacer el extendido con un palillo de madera..

• Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.

• Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).

• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.

• Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra

• Agregar Lugol y esperar un minuto aproximadamente.

• Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo. (las Gram - se decoloran, las Gram + no)

• Enjuagar con agua.

• Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

• luego lavar levemente con agua

• Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Cristal Violeta

 

Compuesto químico empleado como indicador de pH y colorantes.

 

Usos.

• Su principal uso es el de la tintura textil de color purpura y

• para dar tonos violeta oscuro en las pinturas y tintas de impresión.

• Indicador de pH de 0 a 10.

• Como ingrediente activo de la tinción de gram.

• Para conectarse al ADN.

• Trazador fluorescentes y en experimentos de emisión de óptica no lineal.

• Clasificación de bacterias.

 

Aplicación.

• No medico; para la coloración de papel y como un componente de color azul marino y negro para la impresión, bolígrafos y en las impresoras de chorro de tinta.

• Para color izar productos diversos como fertilizantes, anticongelantes, detergentes y chaquetas de cuero.

• En las ciencias biomédicas para ensayos de viabilidad celular.

• En la química como indicador de pH.

• En el área de la física como un trazador fluorescente y en experimentos  de emisión de efectos de óptica no lineal.

• Medico; se utiliza medicamente por sus propiedades antibacterianas,.

• En la medicina forense para desarrollar huellas dactilares.

 

¿Cómo funciona?

 

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana.

 

 

 

Lugol

 

Es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico en agua destilada.

 

Usos.

• Desinfectante  antiséptico.

• Como reactivo en las pruebas de yodo en análisis médicos y de laboratorio.

• Para cubrir deficiencias de yodo.

• Para reconocer la presencia del almidón en los tejidos vegetales.

• Para teñir el núcleo de las células y hacerlo mas visible.

• Para tratamiento de enfermedades relacionadas con la glándula tiroides.

 

Aplicación.

• Reconocimiento de almidón, ya que absorbe el yodo produciendo una coloración azul interna.

• Acuarios marinos, como fuente de yodo y yoduro.

• En la medicina como biopsia para detectar el cáncer de vagina.

• Química analítica para hacer valoraciones cuantitativas.

 

¿Cómo funciona?

 

El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente (son sustancias que aumentan la afinidad de la célula por el colorante. Suelen añadirse después del colorante en determinadas tinciones diferenciales), haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.

 

 

 

Alcohol – Acetona

 

Es un compuesto químico con formula química CH3(CO)CH3 es

un líquido incoloro de olor característico.

 

Usos.

• Fabricación de plásticos y productos químicos.

• Disolvente de sustancias químicas.

• Quitar manchas y el esmalte de uñas.

• En la tinción de gram para realizar la decoloración.

 

Aplicación.

• En la química industrial.

• Disolvente general

• Como aditivo para la comida particularmente se encuentra en el pan donde lo ayuda a madurar y fermentar.

• En el área de la cosmética donde desnaturaliza ciertos alcoholes en los compuestos químicos, dándole al producto un aroma especial.

 

¿Cómo funciona?

 

La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.

 

 

 

Safranina

 

Colorante biológico, su fórmula química es C20N14ClN4, es

un dimetil de safranina.

 

Usos.

• Líquido contraste en algunos protocolos de tinción

• Detecta el cartílago mucina y gránulos de mastocitos

• Indicador redox en la química analítica

• En distintas técnicas histológicas que detectan células.

• Teñir tejidos biológicos.

 

Aplicación.

• En  la tinción de safranina ya que se usa para diferenciar una estructura celular previamente teñida con un colorante.

• En la identificación de procesos degenerativos como la osteoartritis.

• Histología vegetal donde tiñe de rojo los núcleos de paredes celulares secundarias.

• Herramienta de detención de estructuras en las células eucariontes y procariontes.

• En los laboratorios como un colorante fácil de manejar.

 

¿Cómo funciona?

 

Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas.

La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).

 

 

 

 

Aceite de inmersión

 

Aceite hecho principalmente a base de aceite mineral.

 

Usos.

• Para observar un objeto en el microscopio fijado en el portaobjetos.

• Restringe el movimiento de una muestra.

• Para ver frotis bacterianos.

• Facilita la visión del microscopio al entrar en contacto con el cubreobjetos.

 

Aplicación.

• En la biología como aceite a base de un aceite mineral.

• Uso de laboratorio, análisis, investigación y química fina.

• En la microscopía, se elimina casi completamente la deviación de los rayos de luz y se aumenta considerablemente en la eficacia de los objetivos de los microscopios.

• En la microbiología para ver frotis bacterianos.

 

¿Cómo funciona?

 

Restringiendo el movimiento de una muestra. Al intercalar entre el objetivo y el aceite, el índice de refracción en casi igual al vidrio, los rayos emergentes continúan su camino sin desviación, consiguiendo mayor calidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente la visión.