Microbiología

 

Siembra.

 

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de

muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar

un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.

Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una

temperatura adecuada para el crecimiento.

 

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

 

 

 

 

 

1. Que se efectúen asépticamente

2. Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados

3. Que se realicen solo los manipuleos indispensables

4. Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un mechero o bien Flujo laminar.

 

 

Tipos de siembra (placa)

 

Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.

 

Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por inmersión. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.). Este método se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y microaerofílicos.

 

Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción  total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

 

Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.

 

Siembra volumétrica: Este método de siembra consiste en sembrar una muestra liquida cuyo volumen no puede ser predeterminado, en medio de cultivo sólidos o líquidos. Por ejemplo: En las muestras de exudado vaginal tomadas con pipetas de Pasteur, no puede determinarse el volumen, ya que este tipo de pipeta carece de escala de graduación, sin embargo, la orina empleadas en el urocultivo o la sangre para el hemocultivo se puede determinar con pipeta o jeringuilla respectivamente el volumen que será sembrado.

 

Siembra masiva: Cuando se desea realizar una siembra masiva se puede utilizar la espátula de Driglaski. En este caso la gota de muestra liquida se esparce con la espátula por toda la superficie del medio de cultivo sólido imprimiéndo un movimiento en espiral. La siembra masiva también se puede realizar con un hisopo grueso embebido de un cultivo liquido, procediendo a su deslizamiento sobre toda la superficie de una placa de agar.

 

 

 

Técnicas de cultivo en placa:

 

Técnica de siembra por estría en placa

 Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello, con un asa de siembra se toma una muestra de la población mixta y a continuación se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólido preparado en una placa Petri (a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie del medio menos microorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo este proceso varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir de una colonia bien aislada en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con toda seguridad, cultivos axénicos.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Técnica de extensión en placa:

 

Las muestras diluidas se siembran directamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con avuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar, dejando las células microbianas sobre la superficie. En ambas técnicas las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                                              

 

 

Tipos de siembra (Tubo)

 

Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el  tubo con el uso del asa cargada con el  material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

 

Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material  en la superficie de el agar inclinado en un tubo de ensayo,  allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada  y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo.

 

Siembra por punción

Como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las precauciones de asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa. La particularidad que tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el medio de cultivo.

 

 

Técnicas de siembra (tubo)

 

Siembra por inoculación o agitación:

Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se intorduce en el centro del medio liquido, agitándose, no tocando la pared del tubo.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Siembra por estría ( en tubos de agar inclinado):

Muestra de material en asa de siembra, deslizar en zigzag, empezar por superficie mas profunda.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Siembra por picadura:

Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta que la muestra quede bien impregnada al agar.

 

Siembra por vertido en placa:

Diluciones en varios tubos, pipeta 1cc de muestra o dilución, agregar tubo de ensayo estéril, se agrega medio licuado, mantener a 55°C, movimientos rotatorios, solidificar.