Es el ejercicio práctico en el que se ejercen las pruebas de

identificación bacteriana.

En la medicina general es común que llegue un paciente con

síntomas de alguna infección bacteriana, el determinar un

diagnostico y poder interpretar que bacteria causo la molestia

al paciente es aventurado, pues hay muchas bacterias que

causan las mismas enfermedades, por eso es conveniente

realizar pruebas de identificación, que son sumamente

importantes para un buen diagnostico de cualquier patología.

 

Cada género, inclusive especie, tiene diferentes reacciones

cuando se les enfrentan diferentes reactivos, esto se hace a

partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada, con estas

pruebas podremos decir casi con exactitud de que genero y

que especies que esta bacteria. A estas pruebas se les ha

llamado como primarias, secundarias y complementarias.

 

 

1. Pruebas primarias

 

Para la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus características morfológicas, la reacción a la tinción de gram, agrupación, propiedades, morfología colonial, reacciones metabólicas como producción de enzimas de reacciones de oxido – fermentación.

 

La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:

 

Tinción gram:

Revela la forma de la bacteria, agrupación y grupo de taxonómico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo.

La tinción gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.

 

Pasos para realizar la tinción

 

1. Se fija la muestra mediante calor

2. Cristal violeta ( tiñe todas las bacterias, gram + , gram -) durante 1m

3. Se fija con lugol 1 m

4. Se decolora con una mezcla de alcohol y cetona (Los gram – se decoloran)

5. Safranina (colorante de contraste , que tiñe a los gram -) 1m

 

 

Tinción de Ziehl Neelsen:

Las bacterias alcohol – acido resistentes (BAAR), son difíciles de cultivar, tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento, por eso es útil esta tinción de identificación primaria.

 

La tinción de Ziehl Neelsen ( BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la identificación de microorganismos patógenos.

 

 

1. Hacer un frotis de la muestra

2. Dejar los frotis sobre puente de tinción

3. Aplicar Fucsina- Fenicada

4. Calentar con mechero hasta la emisión de vapores

5. Decolorar con alcohol – acido

6. Aplicar azul de metileno (1minuto)

7. Enjuagar con agua

8. Colocar gota de aceite de inmersión

 

 

 

Tinción de esporas:

La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros Bacillus y clostridium.

 

Ciertos tipos de bacterias, producen esporas de resistencia cuya pared celular es característica.

 

• Técnica de Shaeffer- Fulton

 

1. Cubrir la extensión con papel filtro (dificulta la precipitación del colorante)

2. Depositar la preparación sobre una platina de Koch

3. Seguir la tinción con calor: en emisión de vapores durante 5-10 min

4. Lavar con agua abundante

5. Teñir con safranina (2minutos)

6. Lavar con agua y sacar

 

El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. Ejemplos:

 

• Catalosa (+): Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas sp.

 

• Catalosa (-): Streptoccus spp.

 

 

Prueba oxidasa:

Básicamente es la detección de la enzima, muy útil en la identificación de bacterias Gram (-)

 

La reacción de la oxidasa se debe a la presencia del sistema de citocromo – oxidasa, la cual activa citocromos reducidos por oxigeno molecular, por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones.

 

Acido de glucosa:

La mayoría de las bacterias de interés medico usan la glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo

 

• Se determina si la bacteria usa la glucosa produciendo acido y/o gas a partir de dicho carbohidrato

 

 

Acido y  gas a partir de la glucosa:

Escherichia coli

 

Negativo a producción de gas:

Proteus stuartii

 

Prueba de Motilidad:

Llamada también de la gota suspendida. Algunas bacterias son móviles por presentar flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados (monotricos, peritricos etc.)

• La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil

Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada.

 Se le coloca sobre un portaobjetos y se observa el miscroscopio, podremos identificar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones.

Motilidad (+): Como en pseudomonos auroginosa

Motilidad (-): Como en pasteurella multocido

 

 

 

2.  Pruebas secundarias

 

La identificación se fundamenta en la comparación del microorganismo que deseamos identificar con los microorganismos de identidad conocida.

 

La exactitud de la identificación depende de la eficacia del trabajo preparatorio así como su grado.

 

Estas pruebas se identificación de la siguiente manera:

 

Simples: Citrato, Malonato, MR – VP, Nitrato y Lehe Tornasol.

 

Múltiples: TSL, LIA Y SIM

 

Especiales: Coagulosa, Hialurunisada y Acriflavina